Έλεγχος της υγείας των στερεών οργάνων μετά από τη μεταμόσχευση που χρησιμοποιεί το χωρίς κύτταρα DNA

Τα διαγνωστικά βασισμένα στο cfDNA θα μπορούσαν να καταστήσουν τη βιοψία ιστού ξεπερασμένη
Οι δαπανηρές και της εισβολής βιοψίες ιστού για να ανιχνεύσουν την απόρριψη αλλομοσχευμάτων μετά από τη μεταμόσχευση έχουν τους πολυάριθμους περιορισμούς. Δοκιμές βασισμένες στο χωρίς κύτταρα DNA (cfDNA) — τα κυκλοφορώντας τεμάχια του DNA που απελευθερώνονται από τα κύτταρα, τους ιστούς, και τα όργανα δεδομένου ότι υποβάλλονται στο φυσικό κύτταρο θάνατος-έχουν μελετηθεί εντατικά πρόσφατα και θα μπορούσαν τελικά να βελτιώσουν τη δυνατότητά μας να ανιχνεύσουμε την απόρριψη, εφαρμόζουν τις προηγούμενες αλλαγές στη διαχείριση, και ενισχύουν ακόμη και τη μακροπρόθεσμη επιβίωση των μεταμοσχευμένων οργάνων.
Οι δοκιμές CfDNA που παρακάμπτουν την ανάγκη για το ολόκληρος-γονιδίωμα τοποθετώντας διαδοχικά το (WGS) και την ανάγκη για τη a priori γνώση του χορηγού ή/και των λαμβανόντων γενοτύπων έχουν τα ισχυρά λογιστικά πλεονεκτήματα και είναι αυτήν την περίοδο κάτω από την κλινική διερεύνηση. Επιπλέον, η βελτίωση της γνώσης των όργανο-συγκεκριμένων κινητικών χορηγός-παραγόμενος cfDNA (dd -dd-cfDNA) μετά από τη μεταμόσχευση έχει βοηθήσει επίσης να βελτιστοποιήσει αυτές τις δοκιμές. Τα εργαστήρια επίσης έχουν εισαγάγει τις εναλλακτικές μεθόδους για το dd -dd-cfDNA, όπως η ψηφιακή αλυσωτή αντίδραση το (PCR) πολυμεράσεων σταγονίδιων και τα όργανο-συγκεκριμένα σχέδια μεθυλίωσης DNA. Ως τέτοια, ο τομέας των ελάχιστα της εισβολής διαγνωστικών που βασίζονται στο cfDNA είναι όλο και περισσότερο ελπιδοφόρος, μια ημέρα που αντικαθιστά ενδεχομένως τις παραδοσιακές βιοψίες ιστού.
Ο ΡΟΛΟΣ CFDNA ΣΤΗΝ ΑΠΌΡΡΙΨΗ ΟΡΓΆΝΩΝ
Η απόρριψη, που αναφέρεται στον τραυματισμό ενός οργάνου που προκαλείται από το ανοσοποιητικό σύστημα του παραλήπτη, μπορεί να προκαλέσει τη δυσλειτουργία αλλομοσχευμάτων και ακόμη και τον υπομονετικό θάνατο. Η με κύτταρο Τ μεσολαβημένη οξεία κυψελοειδής απόρριψη το (ACR) εμφανίζεται ο συχνότερα μέσα στους πρώτους 6 μήνες μετα-μεταμόσχευσης (1). ACR περιλαμβάνει τη συσσώρευση των τ-κυττάρων CD4+ και CD8+ στο διάμεσο διάστημα του αλλομοσχεύματος δεδομένου ότι το ανοσοποιητικό σύστημα του παραλήπτη αναγνωρίζει τα αντιγόνα στο όργανο όπως ξένο. Αυτά τα τ-κύτταρα αρχίζουν έναν άνοσο καταρράκτη που οδηγεί τελικά στον προγραμματισμένο θάνατο κυττάρων (apoptosis) των στοχοθετημένων κυττάρων. Δεδομένου ότι αυτά τα κύτταρα πεθαίνουν, το genomic DNA διασπιέται και τα τεμάχια του dd -dd-cfDNA, που μετρούν περίπου 140 ζευγάρια το (bp) βάσεων στο μήκος, απελευθερώνονται για να ενώσουν την ομάδα του παραλήπτη cfDNA στο αίμα και εκκρίνονται τελικά στα ούρα (2).
Η κυκλοφορία cfDNA ήταν πρόσφατα ως διαγνωστικό εργαλείο για να αντικαταστήσει τις της εισβολής βιοψίες σε άλλους τομείς της ιατρικής, συμπεριλαμβανομένης της ανάλυσης των εμβρυϊκών τεμαχίων DNA μέσα στη μητρική κυκλοφορία για να προσδιορίσει τις γενετικές ανωμαλίες μέσα - utero και της αλληλοuχίας του κυκλοφορώντας DNA που απελευθερώνεται από τα κύτταρα όγκων για να προσδιορίσει τις καρκίνος-σχετικές μεταλλαγές. Και σε αυτές τις περιπτώσεις καθώς επίσης και στη μεταμόσχευση, η υψηλός-ρυθμοαπόδοση που τοποθετεί διαδοχικά που προσδιορίζει και ποσολογεί τις διαφορές ακολουθίας DNA διακρίνει μεταξύ των δύο διαφορετικών πληθυσμών του cfDNA που προέρχεται από τις ευδιάκριτες πηγές (2). Τρία χαρακτηριστικά του cfDNA το κάνουν έναν άριστο μη καταπατητικό υποψήφιο biomarker για να ανιχνεύσουν την απόρριψη μετά από τη στερεά μεταμόσχευση οργάνων: Μπορεί να ληφθεί από ένα απλό αίμα σύρει, η συγκέντρωσή του που μετριούνται ακριβώς, και η ακολουθία νουκλεοτίδας του που προσδιορίζεται εύκολα. Η χρησιμοποίηση cfDNA ως biomarker για ACR είναι επίσης συμφέρουσα δεδομένου ότι προέρχεται από τα τραυματισμένα κύτταρα του οργάνου και επομένως πρέπει να αντιπροσωπεύσει ένα άμεσο μέτρο του θανάτου κυττάρων που εμφανίζεται στο αλλομόσχευμα. Επιπλέον, cfDNA διατηρεί όλα τα γενετικά χαρακτηριστικά γνωρίσματα του αρχικού genomic DNA, που επιτρέπουν στο γενετικό υλικό που απελευθερώνεται από το όργανο για να διαφοροποιηθεί από το cfDNA που προέρχεται από τα κύτταρα του παραλήπτη που υποβάλλονται στο φυσικό apoptosis (3).
Ο συχνός και ακριβής έλεγχος της υγείας αλλομοσχευμάτων είναι ουσιαστικός για τη μακροπρόθεσμη επιβίωση των παραληπτών μεταμόσχευσης. Για τη μεταμόσχευση το (HT) καρδιών, η endomyocardial βιοψία (EMB) είναι ο τρέχων χρυσός κανόνας για την ανίχνευση ACR (4). Εντούτοις, EMBs είναι δαπανηρό με τους σημαντικούς περιορισμούς, πολλοί από τους οποίους είναι κοινοί για όλες τις βιοψίες οργάνων (5-7). Επιπλέον, η της εισβολής φύση EMBs βάζει HT τους ασθενείς σε κίνδυνο για τις περιπλοκές (6,8,9).
Δυστυχώς, οι διαθέσιμες σήμερα μη καταπατητικές μέθοδοι συμπεριλαμβανομένου echocardiography ή της απεικόνισης το (MRI) μαγνητικής αντήχησης στερούνται την ικανοποιητικές ιδιομορφία και την ευαισθησία για να ανιχνεύσουν σοβαρά την απόρριψη (10-13). Τα αίμα-βασισμένα στο biomarkers, όπως το cfDNA, αντιπροσωπεύουν μια ελπιδοφόρο εναλλακτική λύση που θα μπορούσε να εφαρμοστεί εύκολα στην κλινική πρακτική (14-17).
ΚΙΝΗΤΙΚΕΣ CFDNA ΚΑΤΆ ΤΗ ΔΙΆΡΚΕΙΑ QUIESCENCE ΚΑΙ ΤΗΣ ΑΠΌΡΡΙΨΗΣ
Δεδομένου ότι cfDNA προέρχεται από τη φυσική διαδικασία του apoptosis, όλα τα άτομα έχουν τα ανιχνεύσιμα επίπεδα cfDNA στο αίμα τους (18). Για τα υγιή άτομα, η πλειοψηφία της κυκλοφορίας cfDNA προέρχεται από τα αιματοποιητικά κύτταρα που έχουν υποβληθεί στο φυσικό θάνατο σχετικό με τον κυψελοειδή κύκλο εργασιών. Τα επίπεδα cfDNA κυμαίνονται για πολλούς λόγους συμπεριλαμβανομένης της μόλυνσης, της χειρουργικής επέμβασης, του τραύματος, ή ακόμα και της εξαντλητικής άσκησης (2,19). Επομένως, η ανάπτυξη μιας cfDNA-βασισμένης δοκιμής για να ανιχνεύσει την απόρριψη απαιτεί τις αναμενόμενες κινητικές της απελευθέρωσης dd -dd-cfDNA στη μετα-μεταμόσχευση κυκλοφορίας του παραλήπτη. Αυτή η εκτίμηση είναι ιδιαίτερα σημαντική δεδομένου ότι η απελευθέρωση με τον καιρό της μετα-μεταμόσχευσης dd -dd-cfDNA είναι όργανο-συγκεκριμένη (20-22).
Παραδείγματος χάριν, στο μετα-HT 1 ημέρας το μέσο επίπεδο του dd -dd-cfDNA είναι 3,8 ± 2,3% (20). Εντούτοις, μέχρι 7 ημέρες το επίπεδο του dd -dd-cfDNA έχει μειωθεί γρήγορα και παραμένει με συνέπεια χαμηλό (<1> αντίθετα, οι παραλήπτες των διμερών μεταμοσχεύσεων πνευμόνων βρέθηκαν για να έχουν ένα μέσο μέρος dd -dd-cfDNA 26 ± 14% την πρώτη postoperative ημέρα. Επιπλέον, η μείωση του dd -dd-cfDNA χαρακτηρίστηκε από τα επίπεδα του dd -dd-cfDNA που μειώθηκαν γρήγορα μέσα στην πρώτη εβδομάδα αλλά αφ' ετέρου επιβράδυναν και παρέμειναν γενικά σε 1%-3% (21). Εντούτοις, παρόμοιος με τις μεταμοσχεύσεις καρδιών και νεφρών κατά τη διάρκεια ενός επεισοδίου της οξείας απόρριψης, το επίπεδο του dd -dd-cfDNA αυξήθηκε σημαντικά, αναρριμένος σε μέσο όρο 14%-15%.
Οι διαφορές στη μάζα ιστού και τα ποσοστά κυψελοειδούς κύκλου εργασιών αποτελούν αυτήν την μεταβλητότητα στα επίπεδα απελευθερωμένης dd -dd-cfDNA πρόωρης μετα-μεταμόσχευσης και κατά τη διάρκεια quiescence. Παραδείγματος χάριν, οι διαφορές στην κυκλοφορία των επιπέδων dd -dd-cfDNA στις ήρεμες διμερείς και μεταμοσχεύσεις ενιαίος-πνευμόνων μπορούν να εξηγηθούν από τη διαφορά στον κυψελοειδή κύκλο εργασιών, που είναι 107 εναντίον 58 κυττάρων/δευτερόλεπτο, αντίστοιχα (21). Σε αντίθεση, σε μια ήρεμη μεταμοσχευμένη καρδιά, το κυψελοειδές ποσοστό κύκλου εργασιών είναι μόνο 8 κύτταρα/δεύτερος (21-23). Κατά συνέπεια, μια κατανόηση των αναμενόμενων επιπέδων του dd -dd-cfDNA που συνδέονται με ένα δεδομένο στερεό όργανο είναι ουσιαστική να διευκολύνει την ανάπτυξη των όργανο-συγκεκριμένων δοκιμών που ανιχνεύουν την απόρριψη. Μόλις γίνουν κατανοητές οι κινητικές της απελευθέρωσης cfDNA για ένα ιδιαίτερο όργανο, διάφορες μέθοδοι υπάρχουν για την ποσολόγηση του σχετικού ποσού του dd -dd-cfDNA.
ΣΤΡΑΤΗΓΙΚΕΣ ΓΙΑ ΝΑ ΔΙΑΚΡΙΝΕΙ ΤΟΝ ΠΑΡΑΛΗΠΤΗ ΕΝΑΝΤΙΟΝ ΧΟΡΗΓΌΣ-ΠΑΡΑΓΟΜΕΝΟΥ CFDNA
Χορηγός-λαμβάνων φύλο-κακός συνδυασμός
Για τις μεταμοσχεύσεις οργάνων στις οποίες ο χορηγός είναι αρσενικός και ο παραλήπτης είναι θηλυκός, τα εργαστήρια μπορούν δύναμη αυτός ο κακός συνδυασμός φύλων να υπολογίσουν τα επίπεδα ότι dd -dd-cfDNA από μέσα από το συνολικό cfDNA του παραλήπτη συγκεντρώνουν (17). Οι ερευνητές κατέδειξαν αρχικά τη δυνατότητα πραγματοποίησης αυτής της προσέγγισης στα δείγματα ούρων που λήφθηκαν από τους θηλυκούς νεφρικούς παραλήπτες μεταμόσχευσης που είχαν λάβει ένα νεφρό από τους αρσενικούς χορηγούς και όταν δοκίμασαν η απόρριψη κατέδειξε τα ανυψωμένα επίπεδα του dd -dd-cfDNA στα ούρα τους που περιείχαν συγκεκριμένα τις περιοχές που βρέθηκαν στο χρωμόσωμα Υ (17). Αν και αυτή η προσέγγιση επιτρέπει τη βέβαια διάγνωση της απόρριψης στο αλλομόσχευμα, ο φύλο-κακός συνδυασμός μεταξύ του χορηγού και του παραλήπτη ισχύει σχετικά σπάνιος και όχι παγκοσμίως.
Χορηγός-λαμβάνουσες διαφορές ακολουθίας DNA
Μια μεταμόσχευση οργάνων μπορεί επίσης να θεωρηθεί ως μεταμόσχευση γονιδιώματος, δεδομένου ότι τα κύτταρα μέσα σε ένα μεταμοσχευμένο όργανο περιέχουν τις γενετικές πληροφορίες του χορηγού του. Ως τέτοια, η έννοια της δυναμικής το (GTD) μεταμόσχευσης γονιδιώματος στηρίζεται στην παρουσία γενετικών διαφορών μεταξύ του χορηγού και ο παραλήπτης σε έναν ιδιαίτερο γεωμετρικό τόπο, που μπορεί έπειτα να είναι για να προσδιορίσει την προέλευση της κυκλοφορίας cfDNA (20-24). Ιδανικά, ο παραλήπτης θα ήταν ομοζυγώτης για μια ενιαία βάση (παραδείγματος χάριν, AA) και στον ίδιο γεωμετρικό τόπο ο χορηγός θα ήταν ομοζυγώτης για μια διαφορετική βάση (παραδείγματος χάριν, GG).
Λαμβάνοντας υπόψη τη γενετική ετερογένεια μεταξύ των ατόμων, οι δεκάδες χιλιάδων ενδεχομένως πληροφοριακοί γεωμετρικοί τόποι πέρα από το γονιδίωμα μπορούν να ρωτηθούν χρησιμοποιώντας την υψηλός-ρυθμοαπόδοση τοποθετώντας διαδοχικά για να διακρίνουν το dd -dd-cfDNA από τον παραλήπτη cfDNA (20,24). Αυτή η έννοια ήταν πρώτα διευκρινισμένη χρησιμοποιώντας τα κατατεθειμένα δείγματα από τους καρδιακούς χορηγούς για να λάβει τους a priori γενοτύπους χορηγών για κάθε χορηγός-λαμβάνουσα ένωση. Μετά από να εξαγάγει και να τοποθετήσει διαδοχικά cfDNA από κάθε παραλήπτη, το μέρος των χορηγός-συγκεκριμένων μορίων καθορίστηκε. Στα δείγματα που λήφθηκαν κατά τη διάρκεια ή αμέσως προηγούμενο ένα βιοψία-αποδεδειγμένο γεγονός απόρριψης, το ποσοστό των χορηγός-συγκεκριμένων ενιαίων πολυμορφισμών το (SNPs) νουκλεοτίδας βρέθηκε για να αυξάνεται από <1>3%-4% (24).
Αυτή η πρώτη αναδρομική μελέτη έχει επικυρωθεί τώρα ενδεχομένως. Οι ενήλικοι και παιδιατρικοί παραλήπτες μεταμόσχευσης καρδιών και πνευμόνων στρατολογήθηκαν και οι γενότυποι για κάθε χορηγός-λαμβάνον ζευγάρι λήφθηκαν μέσω των WG με έναν μέσο όρο 53.423 πληροφοριακών δεικτών SNP που προσδιορίστηκε (20). Η γενική, έγκαιρη ανίχνευση της οξείας απόρριψης ήταν ανώτερη από αυτήν AlloMap, των πρώτων τροφίμων και διοίκηση-εγκεκριμένης της φάρμακο μη καταπατητικής προσέγγισης στην ανίχνευση ACR μετά από HT βασισμένη στην ανάλυση transcriptome (25).
Η έρευνα επίσης έχει δείξει ότι τα WG όχι μόνο παρέχουν τις πληροφορίες για ένα εμβόλιο αλλά και ενός ασθενή virome και τη γενική κατάσταση της καταστολής του ανοσοποιητικού συστήματος. Αυτό αντιπροσωπεύει ένα ενδεχομένως μεγάλο πλεονέκτημα μη επιτευκτό από άλλες δοκιμές (26-28).
Εντούτοις, τα WG αντιμετωπίζουν τις προκλήσεις που θα μπορούσαν να το αποτρέψουν από να εφαρμοστούν συνήθως στην κλινική πρακτική. Παραδείγματος χάριν, ενώ οι γενετικές πληροφορίες ενός παραλήπτη μπορούν να ληφθούν εύκολα, αυτό ισχύει όχι πάντα για έναν χορηγό. Επιπλέον, τα WG είναι δαπανηρά, εργασία - εντατική, και χρονοβόρα.
Μια εναλλακτική μέθοδος χρησιμοποιεί μια επιτροπή πολύμορφο SNPs που προσδιορίζεται μέσα στη λίμνη εξαγμένος cfDNA με αυτόν τον τρόπο εξαλείφοντας την ανάγκη για τη a priori γνώση του συγκεκριμένου γενοτύπου ενός χορηγού (29). Αντίθετα από τις μεταμοσχεύσεις νεφρών και συκωτιού, που εμφανίζονται συχνά μεταξύ των στενά συνδεδεμένων ατόμων, τα ζευγάρια χορηγός-παραληπτών για τις μεταμοσχεύσεις καρδιών και πνευμόνων δεν συσχετίζονται χαρακτηριστικά. GTD απαιτεί και του παραλήπτη και του χορηγού μεταμόσχευσης. Εντούτοις, στην πράξη, οι πληροφορίες γενοτύπου χορηγών είναι συχνά μη διαθέσιμες. Εδώ, αντιμετωπίζουμε αυτό το ζήτημα με την ανάπτυξη ενός αλγορίθμου που υπολογίζει τα επίπεδα dd -dd-cfDNA ελλείψει ενός γενοτύπου χορηγών. Ο αλγόριθμός μας προβλέπει την απόρριψη αλλομοσχευμάτων καρδιών και πνευμόνων με μια ακρίβεια που είναι παρόμοια με συμβατικό GTD. Επιπλέον καθαρίσαμε τον αλγόριθμο για να χειριστούμε τους στενά συνδεδεμένους παραλήπτες και τους χορηγούς, ένα σενάριο που είναι κοινό στο μυελό των οστών και μεταμόσχευση νεφρών. Δείχνουμε ότι είναι δυνατό να υπολογίσει το dd -dd-cfDNA στους ασθενείς μεταμόσχευσης μυελών των οστών που είναι ανεξάρτητοι ή που είναι αμφιθαλείς των χορηγών, χρησιμοποιώντας ένα κρυμμένο Markov πρότυπο. Επομένως, οι αλγόριθμοι έχουν αναπτυχθεί για τις μεταμοσχεύσεις καρδιών και πνευμόνων που υποθέτουν ότι ο γενότυπος του χορηγού εμφανίζεται στην ίδια συχνότητα με το γενικό πληθυσμό. Με βάση αυτές τις συχνότητες και τη σύγκριση στο γνωστό γενότυπο του παραλήπτη, το μέρος του dd -dd-cfDNA μπορεί να υπολογιστεί σοβαρά από τη συνολική ομάδα του cfDNA που απομονώνεται από το δείγμα πλάσματος ενός παραλήπτη.
Στην περίπτωση της μεταμόσχευσης πνευμόνων, αυτό το πρότυπο ενιαίος-γονιδιώματος, όταν συγκρίνεται με τη μεθοδολογία που χρησιμοποιεί και το χορηγό και τους λαμβάνοντες γενοτύπους, βρέθηκε για να παρέχει τα συγκρίσιμα μέρη του dd -dd-cfDNA. Εντούτοις, όταν εφάρμοσαν οι ερευνητές αυτόν τον ίδιο αλγόριθμο HT, τα κατ' εκτίμηση επίπεδα του dd -dd-cfDNA δεν συσχετίστηκαν τόσο έντονα όσο στις μεταμοσχεύσεις πνευμόνων. Αυτό να αφορά τα χαμηλότερα απόλυτα ποσά του dd -dd-cfDNA παρόντα μετά από HT. Αυτό είναι ένα άλλο παράδειγμα των όργανο-συγκεκριμένων κινητικών cfDNA που μπορούν να επηρεάσουν τα αποτελέσματα δοκιμής και πρέπει να ληφθούν υπόψη (30).
Στην περίπτωση της νεφρικής μεταμόσχευσης, οι ενδεχόμενες μελέτες έχουν πραγματοποιηθεί για να εξακριβώσουν τη χρησιμότητα των επιπέδων dd -dd-cfDNA, που προσδιορίζεται χρησιμοποιώντας γνωστό χορηγός-συγκεκριμένο SNPs, ως βιώσιμο δείκτη για την απόρριψη. Σε μια τέτοια μελέτη, 384 παραλήπτες νεφρών στρατολογήθηκαν από 14 κλινικές περιοχές για να παρέχουν τα δείγματα αίματος σε σχεδιασμένα διαστήματα και σε περίοδο των κλινικά υποδεδειγμένων βιοψιών (31). Συνολικά, η μελέτη εστίασε στο συσχετισμό μεταξύ της ιστολογίας σε 107 δείγματα βιοψιών από 102 ασθενείς και των επιπέδων του dd -dd-cfDNA που βρέθηκαν στα αντιστοιχημένα δείγματα πλάσματος. Πιο συγκεκριμένα, 27 δείγματα βιοψιών από 27 ασθενείς με την ενεργό απόρριψη λήφθηκαν μαζί με 80 δείγματα βιοψιών από 75 ασθενείς χωρίς ενεργό απόρριψη.
Σε αυτήν την μελέτη, η ενεργός απόρριψη περιέλαβε την οξεία αντίσωμα-μεσολαβημένη απόρριψη το (AMR), χρόνιο AMR, και ACR. Η δοκιμή που χρησιμοποιήθηκε σε αυτήν την μελέτη υιοθέτησε μια διακοπή 1% για το μέρος του dd -dd-cfDNA για να δείξει την παρουσία ή την απουσία ενεργού απόρριψης και βρέθηκε για να έχει την ιδιομορφία 85% (95% CI, 79%-91%) και την ευαισθησία 59% (95% CI, 44%-74%). Η ευαισθησία αυτής της δοκιμής ήταν μεγαλύτερη για τη διάκριση μεταξύ ενεργού και απόντος AMR, όπως η χρήση μιας διακοπής 1% dd -dd-cfDNA βρέθηκε για να έχει μια ιδιομορφία 83% (95% CI, 78%-89%) και την ευαισθησία 81% (95% CI, 67%-100%). Ειδικότερα, και στις δύο περιπτώσεις, η ευαισθησία μειώθηκε ουσιαστικά όταν υπερέβη το μέρος του dd -dd-cfDNA 3%.
Για να βελτιώσουν την ιδιομορφία και την ευαισθησία μιας μη καταπατητικής cfDNA-βασισμένης δοκιμής για να ανιχνεύσουν την απόρριψη μετά από τη νεφρική μεταμόσχευση, οι ανακριτές επίσης έχουν ερευνήσει το απόλυτο ποσό του dd -dd-cfDNA (32-33). Με την ερώτηση του απόλυτου ποσού του dd -dd-cfDNA, κάποιο μπορεί να αποβάλει τις τεχνητές αλλαγές στο μέρος του dd -dd-cfDNA λόγω των αυξήσεων στα συνολικά επίπεδα cfDNA που προκαλούνται από τα γεγονότα μη-απόρριψης, όπως η μόλυνση, το τραύμα, ή η άσκηση, δημιουργώντας ενδεχομένως μια ακριβέστερη δοκιμή.
Για να ερευνήσει αυτήν την δυνατότητα, μια μελέτη υιοθέτησε 32 πληροφοριακές παραλλαγές το (CNVs) αριθμού αντιγράφων βασισμένο στις συχνότητες πληθυσμών, σε αντιδιαστολή με τα σχετικά ποσοστά του χορηγού και λαμβάνοντος SNPs στους δεδομένους γεωμετρικούς τόπους (32). Όλο το CNVs μη παρόν μέσα στο γονιδίωμα ενός παραλήπτη αλλά το παρόν μέσα εξαγμένη cfDNA επομένως υποτίθεται ότι αντιπροσώπευσε το dd -dd-cfDNA.
Κατά τρόπο ενδιαφέροντα, ενώ η ιδιομορφία και η ευαισθησία βελτιώθηκαν συνολικά με τη χρήση των απόλυτων επιπέδων dd -dd-cfDNA, αυτή η δοκιμή είχε επίσης μια μεγαλύτερη ικανότητα να διακρίνει μεταξύ της παρουσίας και της απουσίας του ενεργού AMR, σε αντιδιαστολή με τις περιπτώσεις ενεργού ACR. Επιπλέον, τα επίπεδα κρεατινίνης ορών δεν ήταν ικανοποιητικά στη διάκριση μεταξύ της ενεργά απόρριψης και quiescence, πιθανών επειδή είναι ενδεικτικότερο της glomerular λειτουργίας σε αντιδιαστολή με τη ζημία ιστού νεφρών (31-33).
Μια άλλη μελέτη ερεύνησε τα απόλυτα επίπεδα του dd -dd-cfDNA στους παραλήπτες μεταμόσχευσης νεφρών σχετικούς με τα επίπεδα tacrolimus, ένας immunosuppressant (33). Εδώ, οι ερευνητές διαπίστωσαν ότι το απόλυτο ποσό του dd -dd-cfDNA ήταν ουσιαστικά υψηλότερο στους ασθενείς με τα χαμηλότερα επίπεδα tacrolimus (<8> τα εργαστήρια επίσης έχουν προτείνει τις εναλλακτικές λύσεις στα WG. Η ομάδα μας που εξερευνήθηκε στόχευσε στην αλληλοuχία 124 ιδιαίτερα πολύμορφο (δευτερεύουσα συχνότητα αλληλόμορφων γονιδίων [MAF] >0.4) SNPs χρησιμοποιώντας μια διαθέσιμη στο εμπόριο επιτροπή, τη επόμενη γενιά τοποθετώντας διαδοχικά, και έναν νέο αλγόριθμο (34). Αυτή η προσέγγιση μείωσε σημαντικά το συνολικό ποσό της αλληλοuχίας των απαραίτητων, μειωμένος δαπανών και του χρόνου δοκιμής, και της διευκόλυνσης της γρήγορης ανάλυσης. Εντούτοις, δεδομένου ότι αυτή η δοκιμή στηρίζεται επάνω στις διαφορές σε MAF μεταξύ των ατόμων, δεν θα ήταν γερή για τα στενά συνδεδεμένα χορηγός-λαμβάνοντα ζευγάρια, όπως βλέποντας στην ζω-σχετική δωρεά νεφρών. Παραμένει να επικυρωθεί για την ανίχνευση των μέτριων ή μεγαλύτερων γεγονότων απόρριψης.
Τα εργαστήρια επίσης έχουν εξερευνήσει χρησιμοποιώντας πολύμορφο SNPs για να ποσολογήσουν το dd -dd-cfDNA που συνδυάζεται με την τεχνολογία ψηφιακό PCR σταγονίδιων (30,35-37). Χρησιμοποιώντας 41 ιδιαίτερα πολύμορφο SNPs, το σταθερό νεφρό και HT οι παραλήπτες παρουσίασαν μέρη dd -dd-cfDNA 2%-3% με τους σταθερούς παραλήπτες μεταμόσχευσης συκωτιού που έχουν ένα επίπεδο του 7% (35).
ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ
Η χρήση μιας δαπανηρής και της εισβολής βιοψίας ιστού για να ανιχνεύσει την απόρριψη αλλομοσχευμάτων έχει τους σημαντικούς περιορισμούς. Ως τέτοια, μια ελάχιστα της εισβολής δοκιμή που μπορεί άμεσα και ακριβώς να αξιολογήσει την υγεία του ολόκληρου μεταμοσχευμένου οργάνου αντιπροσωπεύει ένα άγιο δισκοπότηρο στη στερεά μεταμόσχευση οργάνων.
Η χρήση του cfDNA μετά από τη μεταμόσχευση έχει παρουσιάσει κάποια αρχική υπόσχεση, αλλά η περαιτέρω μελέτη και η επικύρωση απαιτούνται για να βελτιώσουν την κατανόησή μας και της βασικής βιολογίας του cfDNA καθώς επίσης και μετα-μεταμόσχευσης συμπεριφοράς της. Αυτή τη στιγμή, είναι σαφές ότι οι σημαντικές όργανο-συγκεκριμένες διαφορές υπάρχουν, και τα σχέδια της απελευθέρωσης cfDNA μπορούν επίσης να διαφέρουν ανάλογα με τον τύπο γεγονότος απόρριψης. Εντούτοις, cfDNA αντιπροσωπεύει μια από τις πιό ελπιδοφόρες τεχνολογίες που αναπτύσσονται ακόμα για να συμπληρώσουν ή ακόμα και να αντικαταστήσουν τελικά τη βιοψία ιστού.